Mikroskopia spór, hýf, cystídií, tramov, na identifikáciu húb

Zložený mikroskop vhodný na štúdium húb

Nasledujúce informácie sú zhrnutým výňatkom z najnovšej knihy Pat O'Reillyho „Fascinovaná hubami“ . Všetky podrobnosti a vzorové stránky nájdete v našom kníhkupectve, kde si môžete objednať kópiu podpísanú autorom online ... (Kniha obsahuje aj slovník mykologických výrazov a my tu máme zhrnutú verziu, ktorá pomôže začiatočníkom ...)

Mikroskopia a fotomikografia

Ak v teréne nemôžete identifikovať hubu, možno budete chcieť priniesť vzorku domov na ďalšie štúdium. Nemá to zmysel, pokiaľ doma nemôžete robiť niečo, čo by ste v teréne nedokázali. Mikroskopické vyšetrovanie sa robí najlepšie v interiéroch, keď máte dostatok času na to, aby ste mohli robiť veci poriadne. Tu je niekoľko tipov na výber a použitie mikroskopu na tento účel.

Mikroskopy pre hračky sú v poriadku na sledovanie štruktúr zvierat a rastlín, ale na mykológiu skutočne potrebujete dobrý mikroskop. Je to preto, že jemné štruktúry húb sú veľmi malé - niektoré sa blížia k hranici toho, čo je možné vyriešiť pomocou svetla. Röntgenové vlnové dĺžky sú oveľa kratšie ako vlnové dĺžky svetelných vĺn, a je možné tak študovať oveľa viac podrobností pomocou röntgenovej mikroskopie. Ak si však myslíte, že optický mikroskop je drahý nástroj na niečo, čo je pre väčšinu z nás iba koníčkom, neuvažujte ani nad tým, že by ste svoj dom zmenili na röntgenový mikroskop s najnižšou úrovňou.

Spóry azonitov Lactarius
Spóry azonitov Lactarius , pozorované cez šošovku mikroskopu s olejovým ponorom

Na štúdium spór plesní, bazídií, cystídií, sphaerocýst a ďalších drobných znakov húb budete potrebovať mikroskop schopný zväčšenia minimálne x 400. V ideálnom prípade choďte na mikroskop s maximálnym zväčšením x 1 000, ale na získanie primerane čistého obrazu pri takom vysokom zväčšení by mal mať šošovku s olejovou imerziou.

Rozmery a ozdoby (napríklad ostnaté bradavice - pozri obrázok vľavo) spór sú kľúčové identifikačné znaky. Aby ste mohli zmerať rozmery vecí, na ktoré sa pozeráte, budete potrebovať okulár, ktorý má očný mikrometer alebo nejaký iný prostriedky kalibrácie. Ak zistíte, že pokyny dodané s mikroskopom sú mätúce (alebo ak máte šťastie, že môžete vyjednávať z druhej ruky bez príručky), bude vám takmer určite niekto z miestnej skupiny plesní ochotný pomôcť s nastavením a kalibráciou vášho prístroja. systém.

Môj vlastný mikroskop je trinokulárny, a tak je adaptér fotoaparátu použiteľný, aj keď sa pozerám cez okuláre. (Väčšinu času jednoducho sledujem obraz, ktorý sa prenáša na obrazovku môjho počítača.)

Medzi ďalšie funkcie mikroskopu, ktoré musíte mať, patria:

  1. Nastaviteľné osvetlenie, najčastejšie priamo z podložného sklíčka, a nazývané osvetlenie svetlého poľa. (Pre biologické nástroje je osvetlenie tmavého poľa tiež zdola, ale v uhle, ktorý zaručuje, že priame svetlo nevstupuje do objektívu; vyžaduje buď špeciálny kondenzátor tmavého poľa, alebo pre malé zväčšenie čierny doraz vložený do dráhy svetla.)
  2. Ovládacie gombíky pre pohyb mechanického stolíka, ktorý drží posúvač
  3. Ovládacie prvky hrubého a jemného zaostrenia

Farbiace chemikálie

Sphaerocysty v kmeňovej štruktúre druhu Russula cyanoxantha, spaľovača dreveného uhlia
Za jeho lámavosť sú zodpovedné sférocysty v kmeňovej štruktúre Russula cyanoxantha , lesnej huby všeobecne známej ako horák na drevené uhlie. Táto fotografia bola urobená mikroskopom so zväčšením x600. Materiál stonky na podložnom sklíčku bol zafarbený farbou Kongo Red.

Jemná štruktúra spór a mnohých ďalších drobných častí húb, na ktoré sa budete chcieť pozrieť pod mikroskopom, sú takmer úplne priesvitné. Vidno ich zreteľne, iba ak sú zafarbené. Ako ďalšia pomoc pri identifikácii mnoho húb produkuje spóry, ktoré pri kontakte s určitými chemikáliami menia farbu, označujú sa ako činidlá (kvôli reakcii, keď s nimi spóry prichádzajú do styku). Tu uvádzame niektoré z chemikálií, škvŕn a reagencií, ktoré sa najčastejšie používajú v mykologickej mikroskopii:

Destilovaná voda

(Áno, starý dobrý H2O!) Ak si chcete pozrieť malé predmety a vidieť ich prirodzené farby, voda je ideálnym zmáčadlom. Voda z vodovodu obsahuje chemické prísady, ktoré by mohli obmedziť životnosť šmykľavky, a dažďová voda je kyslá a rovnako problematická, ale destilovaná voda je lacná a ľahko dostupná. Možno budete musieť pridať kvapku fotografického zmáčadla, aby ste zabránili skresleniu obrazu kvôli malým vzduchovým bublinám pripevneným k spóram alebo iným predmetom. (Tekutina na umývanie riadu funguje!) Pridaním asi 10% glycerínu sa zabezpečí, že podložné sklíčka vydržia pred vysušením oveľa dlhšie.

Amoniak (NH3)

Táto užitočná, ale potenciálne nebezpečná chemikália vydáva mimoriadne štipľavé pary, a preto musí byť fľaša vždy, okrem použitia, vždy bezpečne uzatvorená. (Amoniak pre domácnosť v ktoromkoľvek obchode s hardvérom je v poriadku.) Amoniak je rovnako ako činidlo, ktoré spôsobuje zmenu farby niektorých druhov húb, súčasťou aj niektorých ďalších činidiel. Čistý amoniak je plyn pri normálnej izbovej teplote a pre mykologické použitie je normálnou koncentráciou 10% roztok v destilovanej vode. To je silné a ak sa dostane do očí, spôsobí to vážne poškodenie.

Síran železnatý (FeSO4)

Mnoho chovateľov a mykológov húb nesie vo svojej súprave kryštál síranu železnatého, ktorý sa ľudovo nazýva železné soli, ktorý slúži na trenie húb (najmä krehkých žiabrov) na kontrolu farebnej reakcie. Nechoďte na úkor nákupu kryštálov farmaceutickej kvality; veci predávané v záhradných centrách ako prostriedky na ničenie machu a na znižovanie zásaditosti pôdy sú lacné nečistoty (ups!) a fungujú rovnako dobre.

Hydroxid draselný (KOH)

Používa sa ako upevňovacie médium (zvyčajne spolu s farbiacou chemikáliou) aj ako činidlo, buď v teréne alebo späť na základňu. Povrchy čiapok alebo žiabrov niektorých húb dramaticky menia farbu, keď sú v kontakte s KOH; môžu podľa druhu žltnúť, červené, purpurové, olivové alebo čierne. Takže keď vyrábate sklíčko mikroskopu pomocou KOH, nielen že je chránený proti rozpadu, ale môžete tiež vyvolať diagnostickú farebnú reakciu, ktorá môže niekedy rovnako prispieť k procesu identifikácie, ako veľkosť a tvar údajov získaných mikroskopom.

Melzerovo činidlo

Tento kokteil chemikálií je ťažké získať, pretože jednou z rozhodujúcich zložiek je potenciálne nebezpečná látka chloralhydrát (liek na znásilnenie). Ostatné zložky sa dajú ľahko získať - kryštály jódu, jodid draselný a destilovaná voda. Jód reaguje so škrobovými látkami a vytvára intenzívne modročierne sfarbenie. Spóry húb, ktoré obsahujú škrob, sa označujú ako „amyloid“. Ak sa stanete členom skupiny húb vo Veľkej Británii, je možné, že budete môcť získať Melzerovo činidlo prostredníctvom Asociácie britských húb (ABFG). Spory z druhov húb môžu pri diagnostikovaní Melzerovým činidlom podliehať diagnostickým zmenám farieb. Výtrusy sa nazývajú:

  1. Amyloid, ak majú modro-čiernu farbu.
  2. Dextrinoid, ak nadobudnú červenohnedú farbu.
  3. Inamyloid (alebo negatívny), ak iba žltnú alebo sa vôbec nezmenia.

Tieto výrazy sa používajú v poľných príručkách, ktoré uvádzajú znaky chemického testu pre každý druh.

Škvrny

Asci z Poronia punctata
Asci z Poronia punctata , nechtová huba

Hlavné dôvody na použitie škvŕn pri výrobe podložných sklíčok sú:

  1. zvýšiť kontrast v mikroskopickom obraze
  2. zvýrazniť konkrétne tkanivové štruktúry

Škvrny sa často používajú spolu s inými chemikáliami, ktoré bránia rozpadu alebo vysušeniu predmetného materiálu.

Príklady farbiacich činidiel zahŕňajú:

Kongská červená

Vynikajúca škvrna na všeobecné použitie na pozorovanie jemných detailov hyfálnych štruktúr (napríklad pozri obrázok žiabrovej šupky Amanita rubescens vpravo, kde sú vyznačené rozmery v mikrónoch.) Dodáva sa ako prášok a najlepšie sa rozpúšťa v 10%. roztok amoniaku.

Safranin

Ďalšia škvrna, ktorá produkuje jadrá červených krviniek.

Lactophenol Cotton Blue

Toto zafarbí chitín, vďaka čomu sa štruktúry ako ozdoba spór ukážu oveľa zreteľnejšie ako u väčšiny ostatných moridiel (vrátane červenej farby Kongo Red).

Streľba na rozlúčku - dobre, táto má skôr spoločné s vyhýbaním sa odletu. Medzi vyššie spomenuté chemikálie patria niektoré vážne žieravé, kyslé a toxické látky, a preto sa musia skutočne skladovať tam, kde sa ich deti nemôžu zmocniť. Napríklad výpary z amoniaku môžu popáliť oči - niektoré testy v skutočnosti vyžadujú iba prechod amoniakálnych pár cez tkanivo huby, aby došlo k zmene farby.

Trinokulárny mikroskop

Bezpečný trezor by mohol zachrániť život. Jeden mám priskrutkovaný k stene vedľa lavice, kde si nechávam mikroskop (pozri obrázok vyššie), a je ideálny na skladovanie chemikálií, žiletiek, sklíčok atď.

Spóry

Hore: spóry huby oranžovej kôry Aleuria aurantia

Tvorba snímok

Najjednoduchšie snímky sú spor. (Tu sú zobrazené spóry Agaricus bisporus , komerčnej huby s gombíkmi, ktoré sú vždy k dispozícii v obchodoch s potravinami a supermarketoch.) Všetko, čo musíte urobiť, je umiestniť hubu plodnou stranou nadol na podložné sklíčko mikroskopu a počkať hodinu alebo dve.

Na rozdiel od toho, keď sa pokúšate vytvoriť peknú výtrus, nemusíte ani všetko zakrývať, aj keď to zvyčajne robím len na pripomenutie, že pod sklenenou podložkou je kúsok skla s ostrými hranami. Pretože chcete vidieť samostatné spóry, a nie určovať farbu spór, keď sa vrstva po vrstve hromadí, nepotrebujete hustú potlač a nesmiete ju nechať príliš dlho.

Ak máte na podložnom skle trochu spórového prachu, pridajte kvapku zmáčadla (mydlová voda postačí!) Alebo vhodnú škvrnu, ak sú spóry skôr priehľadné než zafarbené, a na vrchnú stranu položte krycie sklíčko. Melzerovo činidlo je dobrá voľba, pretože pri zlepšovaní kontrastu pri súčasnom držaní podložného sklíčka na svetle uvidíte, či sú spóry amyloidové, dextrinoidné alebo inamyloidové - z toho neskôr ...

Snímka - 1

Výroba diapozitívov z veľmi tenkých plátkov plesňového tkaniva je náročnejšia a mali by ste očakávať viac neúspechov ako úspechov. Problémom je vytvoriť skutočne tenký a rovnomerný plátok, ktorý obsahuje funkcie, ktoré chcete študovať. Na žiabroch agarikoidných druhov by ste možno mali študovať bazídia - (obvykle) kyjovité rozšírenia hyf, na ktorých sa prenášajú sterigmy a spóry.

Po odrezaní tenkého prameňa buď pomocou ostrej žiletky, alebo odtrhnutí prúžku pomocou pinzety s ihlovými nosmi je postup rovnaký ako v prípade spór. Vložte svoj preparát na podložné sklíčko, pridajte niekoľko kvapiek škvŕn a potom krycie sklíčko, jemným tlakom vyrovnajte rez. Buďte jemní: väčšina krycích listov má hrúbku niečo viac ako jednu desatinu milimetra a veľmi ľahko sa zlomia. Prebytočnú škvrnu odstráňte pomocou absorpčného tkaniva a potom počkajte niekoľko minút, kým škvrna prestúpi do vzorky.

Snímka - 2

Variáciou tohto prístupu - skôr ľahšou, ale skôr technikou zásahu a zmeškania - je stlačiť pomerne tenký exemplár medzi dva diapozitívy - so šťastím budú kúsky, ktoré vás zaujímajú, chrliť na jednom z okrajov. Na zvýraznenie týchto okrajových prvkov použite moridlo ako predtým.

Pri štúdiu bazidiomycét pod mikroskopom sa neobmedzujete iba na veľkosť a tvary spór. Môžete tiež vyšetriť rôzne druhy cystídií. Toto sú hyfálne štruktúry, ktoré vyčnievajú z rôznych povrchov. Podľa toho, kde sa vyskytujú, dostávajú rôzne názvy: pleurocystídie sa vyskytujú na žiabrových tvárach, cheilocystídie sú tie, ktoré sa nachádzajú na okrajoch žiabrov, pileocystídie sa vyskytujú na povrchu čiapočky a kalocystídie sa vyskytujú na stonke huby. Tvary cystídií v každej z týchto lokalít sa môžu líšiť a tieto rozdiely vám môžu pomôcť, eh ... rozlišovať medzi druhmi.

Žiabrová trasa Hygrocybe chlorophana

Vyššie uvedená mikrofotografia zobrazuje žiabrovku z Hygrocybe chlorophana , zlatého voskovky. Nie všetky voskovky je možné identifikovať na úrovni druhov skúmaním makroskopických znakov. Niektoré je najlepšie určiť ich vyšetrením pod mikroskopom, zatiaľ čo niektoré potrebujú makroskopické aj mikroskopické vyšetrenie. Rozdrvenie malého kúska žiabrového materiálu (žiabrový lúč) medzi šmykľavku a krycí sklz umožňuje študovať štruktúru tkaniva. Niektoré majú prepletené hyfy; niektoré sú pravidelné (hyfy ležiace navzájom rovnobežne) a iné sú subregulárne (niekde medzi nimi). Tu sú zreteľne viditeľné dlhé bunky Hygrocybe chlorophana , zatiaľ čo hyfové bunky napríklad Hygrocybe miniata , Vermillion Waxcap) sú oveľa kratšie.

Softvér na to, aby sa z mikroskopickej fotografie stala menšia bieda

Ak ste sa niekedy pokúsili vyfotografovať spóry alebo iné kúsky plesňového tkaniva pod mikroskopom, budete vedieť, aké ťažké je všetko zaostriť. Získate jednu časť ostrú a zvyšok je rozmazaný. Problém spôsobuje veľmi obmedzená hĺbka ostrosti dostupná pri vysokom zväčšení. Môže vám prísť na pomoc špecializovaný, ale lacný softvér. Do vzorky tkaniva odoberiete niekoľko obrázkov so zaostrením v rôznych hĺbkach a softvér skonštruuje obrázok pomocou zaostrených častí vašich rôznych obrázkov. Meranie spór plesní je oveľa jednoduchšie vďaka programu s názvom Mycocam4. Produkoval mykológ Richard Shotbolt a je k dispozícii na stiahnutie zadarmo na www.shotbolt.com - a jeho použitie je veľmi jednoduché.

Mikroskopia je odborný predmet, a nie každý, do ktorého by sa chcel zapojiť každý, kto sa zaujíma o plesne. Pre oveľa viac informácií o tejto téme existujú odborné texty, ako aj pomoc pri výbere a nastavení mikroskopu na webových stránkach spoľahlivých nezávislých dodávateľov, ako je Brunel Mikroskopy sú dobrým východiskovým bodom. Spravidla je možné dohodnúť si návštevu s cieľom prediskutovať vaše konkrétne potreby a vyskúšať niekoľko alternatív.

Príklady

Na mnohých našich stránkach o druhoch húb uvidíte príklady fotografií spór urobených pomocou mikroskopu s prílohou pre digitálny fotoaparát. Napríklad pozri Laccaria bicolor , ktorá má zaujímavé spórové ozdoby; a Cuphophyllus pratensis , ktorý má elipsoidné alebo slzovitésubglobózne spóry.


Ak vám boli tieto informácie užitočné, sme si istí, že by vám veľmi pomohla aj naša kniha Fascinovaná hubami od Pat O'Reillyho. Autorsky podpísané výtlačky za špeciálnu zľavnenú cenu sú k dispozícii tu ...

Ďalšie knihy o prírode od spoločnosti First Nature ...